Experiment live verfolgen

Mit Hilfe von CRISPR/Cas9 können Bakterien so verändert werden, dass sie ihre Farbe ändern.

Ursache für die blaue Farbe der Bakterien ist das Enzym beta Galactosidase. Es ist ein Enzym, das den Milchzucker Lactose aufspaltet und damit für die Bakterien nutzbar macht. Im Experiment spaltet das Enzym aber nicht Lactose, sondern die farblose Substanz X-Gal und es entsteht ein blauer Indigofarbstoff. Daher sollten auf den Kontrollplatten blaue Bakterien wachsen.

Das Gen, das für die beta Galactosidase codiert und damit für die Blaufärbung verantwortlich ist, heißt lacZ. Mit Hilfe von CRISPR/Cas9 ist es nun möglich, exakt dieses lacZ-Gen in den Bakterien anzusteuern und abzuschalten. Dazu wurde ein Plasmid konsturiert, welches die Genschere CAS 9 trägt, zusammen mit einer guide RNA, die gegen lacZ gerichtet ist. Diese Plasmid wurde in die Bakterien transformiert. Das Plasmid vermittelt zusätzlich eine Resistenz gegen das Antibiotikum Chlorampenicol. Daher können erfolgreich transformierte Bakterein auf Nährmedienplatten mit Chlorampenicol wachsen und wenn CAS 9 gut arbeitet, sollten auf den Platten ("C/C") weiße Kolonien wachen.

Es wurde eine zweite Transformation durchgeführt, die auch ein Plasmid trägt, welches ebenfalls CAS 9 trägt, aber keine guide RNA. Die Bakterien auf den Platten ("K") müssten dann weiterhin blau wachsen, da das CAS9 Protein nicht zum LacZ geführt wird und diese fologlich nicht schneiden kann.

Die BAkterein wachsen bei 37°C unter einer Bruthaube. Über den Platten befindet sich die Kamera, die alle 30 ein Bild von den Platten macht. In der Endlosschleife untern kann so das Wachstum verfolgt werden.

!!! ACHTUNG: HIER WACHSEN NOCH NICHT DIE CRISPR BAKTERIEN; SONDERN NUR DIE VORKULTUREN OHNE BLAUE FARBE !!!

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